细胞的核数并非一成不变，并非所有细胞仅具有一个细胞核。例如，破骨细胞是一种高度分化的多核细胞，不具备克隆能力，无法进行传代培养，且其体外培养有所困难。

骨代谢：基本知识

首先，让我们了解一些与骨代谢相关的专业术语。

骨重塑

骨重塑是指破骨细胞清除旧骨质或受损骨质，并由成骨细胞形成新骨以替代的过程。该过程受破骨细胞与成骨细胞之间的“交流”调控。

破骨细胞与成骨细胞

破骨细胞（osteoclasts，OCs）：作为骨吸收的细胞，源自造血干细胞，通过分泌酸性酶和蛋白水解酶来降解骨质。成骨细胞（Osteoblasts，OBs）：则是由间充质前体细胞经过转录因子的作用而分化形成的骨形成细胞，最终成熟为骨细胞。

骨矿化

骨矿化指的是钙和磷等无机盐分沉淀在骨组织的过程，使骨骼形成高度矿化的结构。作为一种特殊的结缔组织，骨骼不仅为身体提供结构支撑，还为运动提供肌肉附着点，保护重要器官，并作为无机离子的主要来源，参与体内的矿物质稳态和能量代谢。

骨吸收

骨吸收是指将骨骼中的钙释放到血液中的过程，破骨细胞通过分解骨组织释放钙，是维持骨稳态和健康的重要细胞。这些细胞是由血液和骨髓中的单核/巨噬细胞系分化而来的多核巨噬细胞，其分化过程包括前体细胞、融合的多核破骨细胞及成熟的破骨细胞等阶段。

破骨细胞的体外诱导

以下是使用巨噬细胞系RAW264.7诱导破骨细胞的实验步骤：

1. 使用含10% FBS的α-MEM培养基，将RAW2647细胞制成细胞悬液，以3×10⁴ cells/孔的密度接种于24孔板中。
2. 细胞接种12小时后，加入RANKL（20-100 ng/mL）。每三天更换培养基，并同时补加RANKL。
3. 经过4天的分化培养，明显的多核破骨细胞将逐渐显现，并在第5天至第6天达到巅峰。

RAW2647细胞能表达M-CSF及其受体c-fms。因此，仅靠添加RANKL即可诱导其分化为破骨细胞，无需额外添加M-CSF。

破骨细胞的鉴定方法

形态学鉴定

1. 通过显微镜观察破骨细胞，要求至少有3个细胞核（成熟破骨细胞通常含有10至20个核）。
2. 伪足结构：活化的破骨细胞边缘呈现“皱褶缘”，作为骨吸收功能区域。利用鬼笔环肽染色和共聚焦显微镜观察其特征“封箱带”结构。

功能标志物检测

1. TRAP染色：破骨细胞产生的抗酒石酸盐酸性磷酸酶（TRAP），是破骨细胞的重要鉴别标志物。
2. 骨吸收实验：接种骨髓单核细胞（BMMs）于羟基磷灰石涂层板，检测吸收陷窝。培养期间补充M-CSF和RANKL新鲜培养基，10天后使用超声波去除表面细胞，利用扫描电子显微镜成像。

分子标志物检测

可以通过qPCR与WB检测TRAP、NFATc1、CTSK（组织蛋白酶K）、DC-STAMP等分子标志物的表达水平。对于操作细节，建议参考相关专业文献或实验协议。

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